什么是免疫組化sp法？免疫組化sp法作步驟是什么？

來源：今日熱點時間：2023-06-25 10:35:00

什么是免疫組化sp法?

免疫組化SP法是專為免疫組化和其他免疫檢測而設計的，用以顯示組織和細胞中抗原分布。即鏈霉菌抗生物素蛋白~過氧化物酶連結法。采用生物素標記的第二抗體與鏈霉菌抗生物素蛋白鏈接的堿性磷酸酶及底物色素混合液來測定細胞或組織中的抗原。免疫組化SP大約可形成一百萬個左右的過氧化物酶和五十個左右的鏈霉親和素所形成的復合物。因此大量的酶將保證免疫組化SP法具有超高的靈敏度，以及高敏感性，低背景和操作簡便的優點。

免疫組化sp法作步驟是什么?

1. 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復，可在此步后進行

2.緩沖液洗 3min/2 次。

3. 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。

4. 緩沖液洗 5min/2 次。

5.滴加Ultra V Block ，在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。

(注：孵育不要超過 10 分鐘，否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清，這一步可以省略。)

6. 緩沖液洗 5min/2 次。

7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)

8. 緩沖液洗 5min/2 次。

9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強子)，在室溫下孵育 20 分鐘。

10 .緩沖液洗 5min/2 次。

11 .滴加HRPPolymer(酶標二抗) ，在室溫下孵育 30 分鐘。(注：HRP Polymer 對光敏感，應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)

12 .緩沖液洗 5min/2 次。

13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate)中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen)，混勻后滴加到切片上，孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)

14 .自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。

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